Wnt3a和Activin A共同促进人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化

编号 zgly0001390230

文献类型 期刊论文

文献题名 Wnt3a和Activin A共同促进人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化

作者 周静  李进  林戈  卢光琇 

作者单位 中南大学生殖与干细胞研究所  国家干细胞工程研究中心 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2010年04期

年份 2010 

分类号 R329 

关键词 人胚胎干细胞  限定性内胚层  Wnt3a  Activin A 

文摘内容 【目的】研究Wnt3a和Activin A在限定性内胚层诱导中共同作用的最佳时间窗。【方法】在无饲养层体系培养的人胚胎干细胞中,加入25 ng/mL Wnt3a和100 ng/mL Activin A,共同作用不同时间(1~4 d),收集不同作用时间点(0,1,2,3,4,5 d)细胞,对原条、内中胚层前体标记Brachyury及限定性内胚层标记Sox17分别进行免疫荧光染色,统计阳性细胞总数,计算阳性细胞率。以看家基因β-actin作为对照,采用RT-PCR方法对原肠作用基因(Goosecoid(GSC)、Mixl1)及三胚层发育相关基因(内胚层基因Sox17、Foxa2,内中胚层前体基因Brachyury,中胚层基因Flk-1,外胚层基因Pax6,胚外内胚层基因Sox7、CDX2)的表达进行检测。【结果】Wnt3a与Activin A共同作用1~4 d,均能获得限定性内胚层细胞,其中二者共同作用1 d分别能获得(78.9±7.3)%Brachyury阳性细胞和(85.2±3.8)%的Sox17阳性细胞。RT-PCR结果显示,在Wnt3a与Activin A共同作用下,原肠作用基因及三胚层发育相关基因表达的时间有差异。【结论】Wnt3a和Activin A共同作用1 d,是有效促进人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化的最佳作用时间窗。