野芝麻ISSR-PCR扩增条件优化

编号 zgly0000664968

文献类型 期刊论文

文献题名 野芝麻ISSR-PCR扩增条件优化

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 祁彩虹  金则新  李钧敏  彭礼琼  王强 

作者单位 西南大学三峡库区生态环境教育部重点实验室  台州学院生态研究所 

母体文献 江苏农业科学 

年卷期 2011(2)

页码 80-83

年份 2011 

分类号 S567.239 

关键词 野芝麻  ISSR分子标记  优化  引物筛选 

文摘内容 以野芝麻(Lamium barbatum)DNA为模板,利用单因子试验分别对影响野芝麻ISSR-PCR反应的Mg2+浓度、BSA(小牛血清蛋白)、DNA、TaqDNA聚合酶、4×dNTP和引物的浓度进行了优化,并通过梯度PCR确定试验的退火温度,最终确定野芝麻最佳的反应体系及PCR扩增程序为: 10μL体系,其中包括1×Buffer、Mg2+2.5 mmol/L、BSA10 mg/mL、模板DNA15 ng、TaqDNA聚合酶1.5 U、4×dNTP 0.4 mmol/L、引物15 pmol;扩增程序: 94℃变性5 min;94℃变性30 s,55.2℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,共35个循环;72℃再延伸5 min反应终止。利用优化后的反应条件筛选出10个ISSR引物,并对野芝麻居群进行了遗传多样性分析,多态位点百分率为82.08%,Nei指数为0.171 7,Shannon信息指数为0.238 1,说明野芝麻遗传多样性水平较高。该体系建立了标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力强、重复性好的扩增条件。