两种抗病基因双T-DNA区双元载体的构建

编号 zgly0001390861

文献类型 期刊论文

文献题名 两种抗病基因双T-DNA区双元载体的构建

作者 吴磊  史秀岚  田巍  刘巧泉  王幼平 

作者单位 扬州大学生物科学与技术学院  扬州大学农学院 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2010年05期

年份 2010 

分类号 S336 

关键词 双元载体  双T-DNA区  天麻抗真菌蛋白基因  脂质转移蛋白基因 

文摘内容 选择标记基因的删除是植物转基因工程中重要的步骤之一,双T-DNA区双元载体转化法以其共整合频率高、删除标记基因效率高的优点在植物遗传转化中应用非常广泛。本文通过构建天麻抗真菌蛋白基因、脂质转移蛋白基因双T-DNA区双元载体,为培育不含选择标记基因的抗病新材料奠定基础。通过PCR的方法克隆GAFP基因,产物纯化测序确定序列准确后与pSB130-35S载体进行BamHⅠ、SacⅠ双酶切;pCAMBIA2300-LTP、pSB130-35S经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切,酶切产物纯化后连接,连接产物转化大肠杆菌。采用基因特异性引物进行菌液PCR鉴定阳性克隆,重组质粒pSB130-GAFP、pSB130-LTP双酶切产物大小分别为540bp、1200bp,与预期产物大小一致,pSB130-GAFP、pSB130-LTP双T-DNA区双元载体构建成功。载体pSB130-GAFP、pSB130-LTP转化根癌农杆菌后可以直接用于植物的遗传转化。