家蚕细胞自噬相关蛋白BmATG8的多克隆抗体制备与组织表达分析

编号 zgly0001478190

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕细胞自噬相关蛋白BmATG8的多克隆抗体制备与组织表达分析

作者 杨晓冰  李洪建  吴永鹏  刘庆洪  张敏娟  钱永华  焦锋 

作者单位 西北农林科技大学蚕桑丝绸研究所  中国农业大学生物学院 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2014年05期

年份 2014 

分类号 S881.2 

关键词 家蚕  细胞自噬  BmATG8蛋白  多克隆抗体  组织表达 

文摘内容 自噬是细胞固有的一种降解机制,在生物体的生长、发育以及感染免疫、衰老、死亡等过程中发挥重要作用。进行家蚕细胞自噬相关蛋白基因的克隆和重组蛋白表达,分析细胞自噬相关蛋白在5龄幼虫不同组织的表达水平和同一组织中随5龄发育时间的表达变化,有助于从分子水平了解家蚕细胞自噬的功能。根据GenBank登录的家蚕细胞自噬相关蛋白基因Atg8(BmAtg8)的序列设计引物,以家蚕5龄幼虫中肠cDNA为模板克隆了BmAtg8的354 bp编码区序列,并成功将其连入pET32a(+)质粒中。将重组质粒转化E.coli Rosseta菌株继而诱导表达重组BmATG8蛋白,将该蛋白质纯化后强化免疫新西兰大白兔3次,获得效价达1∶512 000的多克隆抗血清。以此多克隆抗体杂交家蚕组织总蛋白,检测到BmATG8及其与磷脂酰乙醇胺偶联的BmATG8-PE 2条免疫印迹条带。Western杂交表明BmATG8蛋白在家蚕5龄第2天幼虫丝腺、中肠和脂肪体中的表达水平较高,其中在5龄第1~2天和第7~8天丝腺组织的表达水平较高,说明家蚕5龄幼虫这3个组织尤其是这2个时间段的丝腺组织中细胞自噬活性极高,反映出家蚕变态发育前这些组织器官细胞内的代谢活动旺盛。