丹参C4H基因pET32a原核表达载体的构建

编号 zgly0001394581

文献类型 期刊论文

文献题名 丹参C4H基因pET32a原核表达载体的构建

作者 张婷婷  王春丽  韩蕊莲  刘岩  赵旺生  梁宗锁 

作者单位 西北农林科技大学生命科学学院  中国科学院水利部水土保持研究所  天津天士力现代中药资源有限公司 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2011年07期

年份 2011 

分类号 S567.53 

关键词 丹参  肉桂酸-4-羟化酶  pET32a  原核表达载体 

文摘内容 【目的】克隆丹参中肉桂酸-4-羟化酶基因(SmC4H)的核心区,并构建SmC4H基因的原核表达载体。【方法】设计合成SmC4H基因全长引物,应用PCR克隆SmC4H基因的编码区并添加酶切位点,应用EcoRⅤ、NotⅠ双酶切SmC4H-pGM-T后与原核表达载体pET32a连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行双酶切鉴定,诱导表达重组蛋白并进行SDS-PAGE电泳以及Western Blot分析。【结果】克隆得到了1 200 bp大小的基因片段,经测序鉴定其为SmC4H基因片段;连接表达载体测序结果表明,SmC4H-pET32a构建成功,其诱导表达蛋白经SDS-PAGE检测及Western Blot分析发现,重组蛋白表达效果较好,且主要以包涵体形式存在。【结论】成功构建了SmC4H-pET32a原核表达载体,并成功诱导了SmC4H-pET32a重组蛋白的表达。