葡萄座腔菌原生质体的制备及gfp的转化(英文)

编号 zgly0001462605

文献类型 期刊论文

文献题名 葡萄座腔菌原生质体的制备及gfp的转化(英文)

作者 陈亮  孙庚午  王洪凯  吴树敬  林福呈  刘会香 

作者单位 山东农业大学植物保护学院山东省林业有害生物防控工程技术研究中心  浙江大学生物技术研究所水稻生物学国家重点实验室  山东农业大学园艺科学与工程学院作物生物学国家重点实验室国家苹果工程技术研究中心 

母体文献 林业科学 

年卷期 2014年06期

年份 2014 

分类号 S763.1 

关键词 葡萄座腔菌  原生质体制备  再生  转化  gfp 

文摘内容 葡萄座腔菌是木本植物溃疡类病害的重要病原,研究该病菌的侵染和致病过程有助于揭示病原与寄主的互作机制。携带gfp基因并高效表达的病菌可有效地实时检测和分析病菌的侵染过程,但由于该病菌在致病和室内培养过程中均不易产孢,因此,制备高质量的原生质体是进行gfp基因转化和表达的首要步骤。通过对酶的种类、酶解液浓度、菌丝年龄、酶解时间、酶解温度和渗透压稳定剂6个可能影响原生质体制备效率的参数进行分析,结果表明:原生质体最大产量产生的条件是菌龄42 h,以1.5%崩溃酶、1.5%葡聚糖在0.7 mol·L-1NaCl的渗透压稳定剂中酶解3.5 h,最适酶解温度31℃,制备的原生质体在酵母蛋白胨蔗糖培养基(YPS)上再生率最高可达48.33%;通过PEG-CaCl2介导原生质体的遗传转化、gfp基因PCR检测、稳定性检测和荧光显微观察,实现了报告基因gfp在葡萄座腔菌转化子内的稳定遗传和高效表达。