白粉菌侵染后的拟南芥酵母双杂交cDNA文库构建及其利用

编号 zgly0001485368

文献类型 期刊论文

文献题名 白粉菌侵染后的拟南芥酵母双杂交cDNA文库构建及其利用

作者 黄衍焱  杨玲珑  王莹  李冉  鲁黎明  王文明 

作者单位 四川农业大学水稻研究所  四川农业大学农学院 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2015年04期

年份 2015 

分类号 S432.44 

关键词 RPW8  白粉菌  拟南芥  cDNA文库  酵母双杂交 

文摘内容 拟南芥广谱抗病基因RPW8对拟南芥白粉病菌、霜霉病菌和烟草花叶病毒等均具有抗性。为了深入研究其广谱抗病机制,筛选鉴定与RPW8具有直接相互作用的蛋白,我们以含有RPW8的拟南芥纯合转基因系S5为材料,接种拟南芥白粉菌系UCSC1,36 h后取样,构建了白粉菌侵染初期的拟南芥cDNA文库。为了提高文库对长片段基因5’端的覆盖率,分别使用含有oligo(d T)和oligo(d N)的接头引物反转录c DNA第一链,PCR扩增双链c DNA。将纯化后的双链c DNA与线性化载体p GADT7-Rec混合,利用同源重组技术在酵母菌株Y187中构建c DNA文库。经检测,文库转化效率为5.0×106/3μg p GADT7-Rec,滴度为2.5×108CFU·m L-1,插入片段长度在350~2 000 bp之间,平均插入片段大小为750 bp。用RPW8.1和RPW8.2构建诱饵载体,分别获得11和12个候选互作蛋白。结果表明此c DNA文库质量较好,适用于互作蛋白的筛选。