果蝇jumeaux蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

编号 zgly0000751999

文献类型 期刊论文

文献题名 果蝇jumeaux蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 郝阳光  张晴  金丽华 

作者单位 东北林业大学生命科学学院遗传学科 

母体文献 免疫学杂志 

年卷期 2011,27(12)

页码 1038-1042

年份 2011 

分类号 Q352 

关键词 jumu蛋白  多克隆抗体  免疫荧光染色  基因功能 

文摘内容 目的原核表达及纯化重组果蝇jumeaux(jumu)蛋白,制备大鼠抗果蝇jumu多克隆抗体。方法用RT-PCR方法扩增jumu基因,并将其克隆到原核表达载体pRSETA中,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG诱导His-jumu融合蛋白的表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot方法鉴定基因片段的正确性及蛋白表达的特异性后,用Ni-NTA亲和层析柱纯化带有6×His标签的融合蛋白,用纯化后的蛋白免疫SD大鼠制备多克隆抗体。以Western blot、免疫荧光染色法鉴定抗体的特异性,并用制备的抗体检测jumu在果蝇不同器官中的表达情况。结果成功构建了pRSETA-jumu原核表达质粒,jumu融合蛋白在大肠杆菌内高表达并纯化,免疫SD大鼠得到抗jumu多克隆抗体。用Western blot和免疫荧光染色检测发现制备的抗体有较强的特异性,并能检测内源性蛋白。通过免疫荧光染色发现jumu的表达存在组织特异性,且在唾液腺中的表达量最高。结论成功获得了抗jumu蛋白的特异性抗体,为进一步研究jumu蛋白的功能和作用机制奠定了基础。