利用抑制性消减杂交技术分离草莓抗炭疽病相关基因

编号 zgly0000773192

文献类型 期刊论文

文献题名 利用抑制性消减杂交技术分离草莓抗炭疽病相关基因

学科分类 220.45;经济林学

作者 苗立祥  张豫超  杨肖芳  张跃建  王汉荣  吴延军  张慧琴  蒋桂华 

作者单位 浙江省农业科学院园艺研究所  浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所 

母体文献 中国农学通报 

年卷期 2011,27(13)

页码 183-187

年份 2011 

分类号 S668.4 

关键词 草莓  抑制性消减杂交  草莓炭疽病  cDNA文库 

文摘内容 利用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),比较接种炭疽病菌与未接菌草莓之间的基因表达差异,筛选抗草莓炭疽病菌的差异表达基因片段,为草莓抗炭疽病遗传育种提供理论依据。分别提取接种草莓与未接种草莓叶片的总RNA,分离mRNA,逆转录成cDNA,利用RsaI进行酶切,然后以接种叶片酶切cDNA为试验方(tester),以未接菌草莓叶片酶切cDNA为驱动方(driver),构建了草莓抗炭疽病基因消减文库。菌落PCR结果表明,插入片段大部分在100～1000bp之间,文库质量好。对文库中1500个阳性克隆进行测序,共得到了1377个有效的ESTs序列。利用NCBI数据库进行Blast同源性比较发现,这些ESTs可能与胁迫反应、信号转导、蛋白合成、蛋白相互作用、物质代谢、跨膜通道、转录因子、金属转运及未知或假定蛋白等有关,ESTs序列的获得为后续草莓抗炭疽病相关基因的克隆、表达和转基因研究提供了参考。