红芪ISSR-PCR体系的建立及优化

编号 zgly0001566458

文献类型 期刊论文

文献题名 红芪ISSR-PCR体系的建立及优化

作者 强正泽  王燕  李硕  王明伟  李成义 

作者单位 甘肃中医药大学药学院 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2017年08期

年份 2017 

分类号 S567.239 

关键词 红芪  ISSR-PCR体系  单因素  中心复合设计 

文摘内容 通过单因素与中心复合设计相结合的方法建立优化红芪ISSR-PCR反应体系,并筛选引物,优化电泳时间及扩增循环数。建立的红芪ISSR-PCR反应体系为:25μL反应体系中10×PCR Buffer(Mg2+)3.5μL、模板DNA（30 ng/μL）2μL、PCR扩增引物2μL、Taq DNA聚合酶为1.25 U、d NTPs为2μL,dd H2O 14.5μL,建立的扩增程序:94℃预变性5 min,开始34个循环;94℃变性30 s,后据不同退火温度的引物复性45 s,72℃延伸2 min,循环结束后72℃延伸7 min。本研究筛选出红芪扩增的引物17条;PCR反应产物电泳时间为120 min,最佳循环数为34,建立了稳定的体系,为进一步研究红芪的遗传多样性及遗传结构提供了帮助。