早熟砂梨ISSR-PCR反应体系的建立与优化

编号 zgly0001445372

文献类型 期刊论文

文献题名 早熟砂梨ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作者 宋燕春  李永裕  陈建烟  黄添毅  龚理  吴少华 

作者单位 福建农林大学园艺学院 

母体文献 亚热带植物科学 

年卷期 2013年02期

年份 2013 

分类号 S661.2 

关键词 早熟  砂梨  ISSR  体系优化 

文摘内容 以我国南方主栽的早熟砂梨品种‘翠冠’Pyrus pyrifolia‘Cuiguan’为材料,对ISSR技术体系中的模板DNA浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度、dNTP浓度、Mg2+浓度、退火温度、PCR循环数等7个主要因素进行优化和筛选,建立了适合早熟砂梨的ISSR-PCR反应体系。最终反应体系为20μL体系中10×PCR buffer(不含Mg2+)2μL,模板DNA浓度60 ng,TaqDNA聚合酶0.75 U,引物浓度1μmol/L,dNTP浓度90μmol/L,Mg2+浓度2.25 mmol/L。扩增程序为:预变性94℃5 min,变性94℃45 s,退火45 s,72℃延伸1 min,共42个循环,然后72℃再延伸10 min,4℃保存,用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测多态性。