O型口蹄疫病毒核酸检测标准样品的制备

编号 zgly0001469522

文献类型 期刊论文

文献题名 O型口蹄疫病毒核酸检测标准样品的制备

作者 孙涛  梁成珠  邓明俊  郑小龙  王群  雷质文  曹丙蕾  凌宗帅 

作者单位 山东出入境检验检疫局  济南出入境检验检疫局 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2014年02期

年份 2014 

分类号 S852.659.6 

关键词 定值  O型口蹄疫病毒  实时定量RT-PCR  标准样品 

文摘内容 利用基因克隆和体外转录技术制备O型口蹄疫病毒(FMDV)核酸检测标准样品。设计O型FMDV 3D基因的全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至PGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物。采用实时荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托外部实验室采用外标实时定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值。通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量(拷贝数),并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算。均一性结果显示瓶间差异小于5%,稳定试验表明室温20℃~25℃(相对湿度20%~50%)14d,2℃~8℃3个月及-20℃保存1年的含量均无明显变化。核酸标准物质定值为(1.260±0.485)×108 copies,可用作O型FMDV通用核酸检测的标准质控品。