病毒性神经坏死病病毒核酸检测用标准物质的制备

编号 zgly0001572191

文献类型 期刊论文

文献题名 病毒性神经坏死病病毒核酸检测用标准物质的制备

作者 段燕喻  陈茹  吴晓薇  朱道中  林志雄  田纯见  刘志玲 

作者单位 广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心广东省动植物与食品进出口技术措施研究重点实验室 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2018年02期

年份 2018 

分类号 S941.41 

关键词 病毒性神经坏死病  实时定量RT-PCR  标准物质 

文摘内容 利用基因克隆和体外转录技术,制备病毒性神经坏死病病毒(Nervous necrosis virus,NNV)核酸检测标准物质。设计NNV RNA2基因的特异性引物,通过RT-PCR获得目的片段并连接至p GEM-T载体;采用体外转录方法,获得大量纯品RNA。初步定量稀释至约10~8 copies/μL,均匀性检验结果显示样品间差异<5%;稳定性检验表明,室温(20~25℃)保存7 d、冷藏(2~8℃)保存1个月和冷冻(-20℃)保存6个月的含量均无明显变化。采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法,对转录的RNA片段进行定值,并根据委托单位的定值结果进行不确定度估算。核酸标准物质定值为(8.452±0.068)×10~8 copies/μL,可用作NNV核酸检测的标准质控品。