牛IgG2 Fc受体的真核表达、纯化与结晶

编号 zgly0001671662

文献类型 期刊论文

文献题名 牛IgG2 Fc受体的真核表达、纯化与结晶

作者 黄晓静  李睿  马红芳  冯丽丽  乔松林  邓瑞广  张改平 

作者单位 河南农业大学牧医工程学院  河南省农业科学院动物免疫学重点实验室  扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2019年08期

年份 2019 

分类号 S852.4 

关键词 牛IgG2Fc受体  蛋白表达  蛋白结晶 

文摘内容 【目的】制备牛IgG2 Fc受体（boFcγ2R）蛋白并分析其结构与生物学功能,为进一步研究其免疫学功能奠定基础。【方法】PCR扩增boFcγ2R的胞外区基因片段,将其克隆至真核表达载体pMT/BiP/V5-His A构建重组pMT/BiP-boFcγ2R-His质粒,利用果蝇胚胎Drosophila Schneider 2（S2）细胞表达boFcγ2R胞外区重组蛋白,通过镍柱亲和层析、凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化,利用Dot-blot验证其生物学功能;采用蒸汽扩散坐滴法对目的蛋白进行结晶,对晶体进行X-ray衍射分析;利用去糖基化酶Endo Hf和PNGase F对目的蛋白进行处理,以验证其糖基化修饰与晶体无衍射之间是否存在因果关系。【结果】PCR扩增获得了663 bp的boFcγ2R基因胞外区片段。成功构建了pMT/BiP-boFcγ2R-His载体,将其转染S2细胞后诱导表达出26 ku的boFcγ2R胞外区重组蛋白。SDS-PAGE结果显示,通过镍柱亲和层析、凝胶过滤层析的纯化方法得到了高纯度的boFcγ2R胞外区重组蛋白;Dot-blot结果显示,该蛋白具有较好的生物学功能。蛋白结晶的2个条件是:体积分数15%TacsimateTM（pH 7.0）、0.1 mol/L HEPES （pH 7.0）、20 g/L PEG 3350和0.1 mol/L HEPES （pH 7.5）、250 g/L PEG 3350。蛋白初筛晶体无衍射,去糖基化试验验证了boFcγ2R胞外区蛋白初筛晶体无衍射可能与其糖基化有关的推测。【结论】得到了高纯度的boFcγ2R胞外区重组蛋白,获得其初筛晶体。