褐飞虱细胞色素P450基因CYP4C62的原核表达及多克隆抗体的制备

编号 zgly0001478113

文献类型 期刊论文

文献题名 褐飞虱细胞色素P450基因CYP4C62的原核表达及多克隆抗体的制备

作者 孙海霞  陈俊  杨之帆 

作者单位 湖北大学生命科学学院  生物资源绿色转化湖北省协同创新中心  武汉科技大学化学工程与技术学院 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2014年06期

年份 2014 

分类号 S433.89 

关键词 褐飞虱  细胞色素P450基因  原核表达  蛋白纯化  多克隆抗体  免疫特异性 

文摘内容 【目的】细胞色素P450单加氧酶在昆虫生长发育和适应环境过程中发挥着重要功能。【方法】本研究克隆了褐飞虱Nilaparvata lugens细胞色素P450基因CYP4C62的开放阅读框(不含信号肽编码序列部分),在大肠杆菌Escherichia coli中实现了高效表达,经Ni-NTA琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化得到了重组的CYP4C62蛋白。将该蛋白免疫日本大耳白兔Oryctolagus cuniculus雄兔,制备了兔抗CYP4C62血清抗体。采用间接ELISA方法检测了血清抗体的效价;并通过Western印迹杂交检测了该抗体的免疫学特异性。【结果】结果表明,通过大肠杆菌表达出的CYP4C62蛋白相对分子量为56 kD。间接ELISA法检测表明,制备的兔抗CYP4C62抗体的效价达到1∶100 000。Western印迹杂交证实,该抗体既可与异源表达的CYP4C62蛋白特异性结合,也可以与褐飞虱总蛋白中内源的CYP4C62特异性结合,表明具有较好的免疫反应特异性。【结论】CYP4C62多克隆抗体的成功制备,为后续分析CYP4C62在褐飞虱各组织中的时空表达水平,并通过免疫组织化学法定位分析该蛋白的组织、细胞及亚细胞分布规律,及最终解析CYP4C62的生物学功能奠定了基础。