利用共转化方法创制携带Pi9抗稻瘟病基因的无选择标记转基因水稻

编号 zgly0001693850

文献类型 期刊论文

文献题名 利用共转化方法创制携带Pi9抗稻瘟病基因的无选择标记转基因水稻

作者 潘龙玉  李军  王歆  刘中来  赵建华  刘雄伦  戴良英  毛雪琴  瞿绍洪 

作者单位 浙江师范大学化学与生命科学学院  浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所  湖南农业大学作物种质创新与资源利用省重点实验室  浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2020年02期

年份 2020 

分类号 S435.111.41 

关键词 水稻(Oryzasativa)  共转化  稻瘟病(Magnaportheoryzae)  转基因植物  选择标记 

文摘内容 水稻稻瘟病是由子囊菌(Magnaporthe oryzae)引起的水稻灾害性病害。培育抗病品种是防治稻瘟病最经济有效的措施之一。水稻Pi9抗稻瘟病基因来源于小粒野生稻并已被克隆和应用于转基因育种。为了提高无选择标记转基因植株的选择效率,将绿色荧光蛋白(GFP)用作可视遗传标记,对双菌株共转化系统进行改良:目的基因载体携带Pi9抗稻瘟病基因;标记基因载体用潮霉素磷酸转移酶(HPT)作为植物转化选择标记,用GFP作为负选择标记,筛除标记基因分离植株。两种载体的农杆菌转化株混合,分别与水稻品种‘浙恢414’、‘浙粳22’、‘浙11B’、‘日本晴’、‘空育131’和‘粤泰B’的愈伤组织共培养,然后从5%～38.3%的起始愈伤组织筛选获得了转化愈伤组织(HPT+GFP+)。对T0植株进行Pi9基因PCR检测,11.8%～77.8%的T0植株为共转化植株(HPT+GFP+Pi9+)。对共转化植株T1代进行绿色荧光检测,筛选阴性植株(GFP-),再通过PCR筛选Pi9+植株。根据13个T1群体的研究结果,61%的共转化植株在T1代分离出无选择标记转基因植株(HPT-GFP-Pi9+)。转Pi9的无选择标记植株和后代株系对水稻稻瘟病呈抗病反应。因此,本研究通过GFP标记提高了双菌株共转化系统的选择效率,转Pi9的无选择标记水稻株系为水稻抗稻瘟病育种提供了有用的遗传资源。