人抑制素M突变体在毕赤酵母中的分泌表达研究

编号 zgly0000710038

文献类型 期刊论文

文献题名 人抑制素M突变体在毕赤酵母中的分泌表达研究

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 范守城  张云茹  刘静 

作者单位 重庆生产力促进中心  重庆理工大学药学与生物工程学院 

母体文献 重庆医科大学学报 

年卷期 2010,35(11)

页码 1680-1683

年份 2010 

分类号 Q94 

关键词 抑瘤素M  突变体  毕赤酵母  分泌表达 

文摘内容 目的: 构建重组人抑瘤素M突变体(Recombinant human mutant oncostatin M,rhMut-OSM)毕赤酵母分泌表达菌株。方法: 将人抑瘤素M蛋白成熟蛋白编码序列同义突变成毕赤酵母偏好密码子,同时将100位和217位Asn突变成Glu,消除糖基化位点,人工合成人抑瘤素突变体基因。将基因直接连接到pPIC9载体信号肽识别序列之后,构建毕赤酵母真核表达载体pPIC9-rhMut-OSM,电转化毕赤酵母菌株GS115,用PCR法筛选阳性克隆,SDS-PAGE和Western blotting方法筛选能够稳定、高效分泌表达rhMut-OSM的酵母工程菌。结果: 培养液上清经SDS-PAGE和Western blotting证实获得了相对分子质量约为22kD的rhMut-OSM,实现了非糖基化表达,表达量高峰出现在诱导72 h后,摇瓶表达量为400 mg/L。结论: 成功构建了重组人抑瘤素突变体毕赤酵母工程菌株,能稳定、高效分泌表达rhMut-OSM。