口蹄疫病毒通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法的建立

编号 zgly0001655634

文献类型 期刊论文

文献题名 口蹄疫病毒通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法的建立

作者 谢彩华  班付国  闫若潜  王东方  张煜  刘梅芬  赵雪丽  马震原  王华俊  王淑娟 

作者单位 河南省动物疫病预防控制中心  开封市动物卫生监督所 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2018年12期

年份 2018 

分类号 S852.65 

关键词 口蹄疫病毒  二重实时荧光RT-PCR  检测方法 

文摘内容 为建立一种快速、敏感、特异的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)分型鉴别诊断实时荧光RT-PCR(Fluorescence quantitative,FQ-PCR)检测方法,根据O、A、AsiaⅠ三种血清型FMDV保守基因序列,设计能够检测到FMDV的特异性通用检测引物和A型检测引物,以及不同荧光素标记的MGB探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了FMDV通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法,对123份疑似FMDV感染的临床样品进行了检测。结果显示,建立的FMDV通用型、A型二重实时荧光RT-PCR检测方法在10~1～10~7拷贝/μL模板范围内有很好的线性关系;对pGEM-T/FMDV-T和pGEM-T/FMDV-A重组质粒出现阳性扩增信号,但对正常细胞培养物对照和其他7种病原对照未扩增出特异性曲线;自123份疑似FMDV感染样品中,检出10份FMDV-T阳性,6份FMDV-T/FMDV-A双阳性并且与基因测序结果一致。结果表明,本研究建立的FMDV通用型、A型二重实时荧光RT-PCR检测方法重复性好、敏感性高、特异性强,最低检测模板浓度为10拷贝/μL,可用于FMDV的快速分型检测,为FMDV的早期检测及临床诊断提供了新方法。