家蚕微孢子虫蓖麻毒蛋白B链基因RBL463-4的克隆及在毕赤酵母中的表达

编号 zgly0001381992

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕微孢子虫蓖麻毒蛋白B链基因RBL463-4的克隆及在毕赤酵母中的表达

作者 李能章  潘国庆  李田  贾立丽  邓远洪  周泽扬 

作者单位 西南大学蚕学与系统生物学研究所  西南大学动物科技学院重庆市牧草与草食家畜重点实验室  重庆师范大学生命科学学院 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2010年06期

年份 2010 

分类号 S884.21 

关键词 家蚕微孢子虫  蓖麻毒素B链蛋白  RBL463-4基因  毕赤酵母表达  免疫印迹法 

文摘内容 基于家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)基因组中发现的蓖麻毒素B链(ricin B chain)序列数据设计引物,提取感染Nb第8天的家蚕幼虫中肠组织总RNA,利用RT-PCR方法扩增出RBL463-4基因,并将其克隆进毕赤酵母表达载体pPICZα-A中,构建重组酵母表达载体pPIC-R4。重组质粒pPIC-R4经SacⅠ线性化后,电击导入毕赤酵母X33中,利用博莱霉素(zeocin)筛选获得重组酵母X33/RBL463-4。以2%甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE、Western blot检测表达产物,结果出现25kD和20kD2种蛋白,其中25kD蛋白与预测融合蛋白大小一致,表明获得了RBL463-4的融合蛋白。研究结果为进一步探究RBL463-4蛋白在家蚕微孢子虫侵染宿主过程中的功能作用奠定了基础。