猪圆环病毒2型SYBR-Green 1实时荧光定量PCR检测方法的建立

编号 zgly0001373602

文献类型 期刊论文

文献题名 猪圆环病毒2型SYBR-Green 1实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者 贾艳艳  李明凤  王东方  崔保安  陈红英  魏战勇  吕晓丽  郭显坡 

作者单位 河南农业大学牧医工程学院  河南省动物性食品安全重点实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2009年03期

年份 2009 

分类号 S858.28 

关键词 猪圆环病毒2型(PCV2)  SYBR-Green1  实时定量PCR  PCR检测方法 

文摘内容 【目的】建立一种能够快速、灵敏地检测猪圆环病毒2型(PCV2)的SYBR-Green 1实时荧光定量PCR方法。【方法】根据已报道的PCV2ORF2基因组序列,设计并合成1对引物。通过常规PCR扩增PCV2ORF2基因,将鉴定正确的ORF2基因片段克隆入pTG19-T载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR-Green 1荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,并做灵敏性、特异性和重复性试验。【结果】PCV2荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线特异,相关系数为0.9988,最低检测的拷贝数为1拷贝/25μL,特异性和重复性较好。【结论】建立了检测PCV2的SYBR-Green 1荧光定量PCR方法,为该病的早期诊断及定量分析PCV2感染程度奠定了基础。