Flag标签抗原的偶联及其单克隆抗体的应用研究

编号 zgly0001400394

文献类型 期刊论文

文献题名 Flag标签抗原的偶联及其单克隆抗体的应用研究

作者 王云龙  李忠信  李恒思  李玉林  王继美  刘旺根  李兆学 

作者单位 河南工业大学  河南省生物工程技术研究中心  郑州大学 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2011年01期

年份 2011 

分类号 R392 

关键词 Flag标签  偶联  单克隆抗体  免疫亲和层析 

文摘内容 探讨不同免疫原制备抗Flag标签单克隆抗体的效果,以及Flag标签单克隆抗体在融合蛋白纯化中的应用。通过碳化二亚胺分别合成Flag-BSA、Flag-OVA、Flag-KLH3种完全抗原,采用SDS-PAGE和免疫效价对比方法确定偶联效果,选最优者利用杂交瘤技术制备抗Flag标签单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水,并对其纯化、分析和鉴定。制备交联抗Flag-mAb的亲和层析柱,纯化带Flag标签的融合蛋白,经SDS-PAGE电泳后薄层扫描分析纯度,用Western blot检测mAb对融合蛋白的反应性。Flag-KLH偶联效果最好,小鼠免疫效价在104以上,共制备3株抗Flag标签单克隆抗体杂交瘤细胞株2B-7、3C-5、5F-2,分泌抗体均为IgG1类型,与其他融合蛋白标签无交叉反应,经亲和层析纯化融合蛋白纯度达85%,且都可用于融合蛋白的Western blot检测,建立了带Flag标签的融合蛋白纯化和检测方法。成功偶联了Falg完全抗原并制备单克隆抗体,为带Flag标签的融合蛋白纯化提供重要工具。