葡萄果实β–葡萄糖苷酶基因克隆、原核表达及活性检测

编号 zgly0001420155

文献类型 期刊论文

文献题名 葡萄果实β–葡萄糖苷酶基因克隆、原核表达及活性检测

作者 董银行  郭家选 

作者单位 北京农学院植物科学技术学院  农业应用新技术北京市重点实验室 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2012年06期

年份 2012 

分类号 S663.1 

关键词 葡萄  果实  β–葡萄糖苷酶1  脱落酸  基因  克隆  原核表达 

文摘内容 以‘玫瑰香’葡萄着色期的果肉为试材,通过反转录技术克隆了ABA合成相关酶β–葡萄糖苷酶基因VvBG1的1 518 bp编码区核苷酸序列,其编码1个含有505氨基酸的多肽。生物信息学分析表明,VvBG1含有1个跨膜区和糖基水解酶1超家族保守域。通过BamHⅠ和XhoⅠ限制性内切酶将除去信号的编码区克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),成功诱导并纯化了VvBG1融合蛋白。经过透析复性和超滤浓缩得到了0.8 mg.mL-1可溶的融合蛋白。通过纯化蛋白葡萄果肉均浆液孵育试验和GC–MS ABA含量分析证实了葡萄果实中β–葡萄糖苷酶VvBG1具有较高的生理活性。