泰泽病原体nested-PCR检测方法的优化及应用研究

编号 zgly0000703747

文献类型 期刊论文

文献题名 泰泽病原体nested-PCR检测方法的优化及应用研究

作者 冯洁  谢建云  胡建华  高诚 

作者单位 上海实验动物研究中心  上海市实验动物质量监督检验站 

母体文献 实验动物与比较医学 

年卷期 2010(3)

页码 183-187

年份 2010 

分类号 Q95-33 

关键词 泰泽病原体  Nested—PCR  IFA 

文摘内容 目的对泰泽病原体nested—PCR检测方法进行优化和应用研究。方法以感染泰泽病原体RJ株的大鼠肝组织作为阳性对照, 按国标GB/T 14926.10—2008《实验动物泰泽病原体检测方法》间接免疫荧光检测fIFA)呈阳性的上海地区大鼠肝组织为材料, 对本室已建立的泰泽病原体nested—PCR检测方法中的DNA抽提方法和PCR过程进行优化, 并应用于22只免疫抑制实验动物的泰泽病原体检测。结果肝脏组织DNA以酚/氯仿抽提法为好; nested—PCR出现196bp的特异性条带, 此方法的敏感性达1pg; 产物纯化后进行测序比对分析显示, 上海地区实验大鼠感染样品以及RJ株感染样品的序列均与Genbank中泰泽病原体16S rRNA(Genbank D14638.1)的同源性为100%。应用研究表明, 22个样品中IFA检测阳性样品8个, 阳性率为36.4%; Nested-PCR检测阳性样品13个, 包含所有的IFA阳性样品, 阳性率为59.1%。结论本方法灵敏度高, 特异性强, 经进一步应用改进后, 可用于泰泽病原体的检测。