黑果枸杞ISSR-PCR反应体系的正交设计优化

编号 zgly0001648445

文献类型 期刊论文

文献题名 黑果枸杞ISSR-PCR反应体系的正交设计优化

作者 钱前  王钧  王莉  李毅  胡延萍 

作者单位 中国科学院西北高原生物研究所青海省青藏高原特色生物资源研究重点实验室  中国科学院大学 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2018年19期

年份 2018 

分类号 S567.19 

关键词 黑果枸杞  枸杞属  ISSR-PCR  正交试验设计  反应体系 

文摘内容 黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr.）为茄科枸杞属小灌木。果实为黑紫色球形浆果,具有较高的药用价值、营养价值、生态价值和经济价值。该研究以青海省野生黑果枸杞为材料,将对黑果枸杞ISSR-PCR反应产生主要影响的五种因子(Taq DNA聚合酶, dNTP, Mg2+,引物和模板DNA)进行L16（45）的正交试验,以建立黑果枸杞ISSR-PCR最佳反应体系,并对反应体系进行验证。在此基础上筛选出适宜的ISSR引物,用梯度法优化各引物的最佳退火温度。结果表明:黑果枸杞20μL ISSR-PCR反应体系中包括Taq DNA聚合酶0.02 U/20μL,Mg2+ 1.65 mmol/L,dNTP 0.15 mmol/L,引物0.60μmol/L和模板DNA 50 ng;在100条ISSR引物中筛选出16条最适引物,并确定了各引物的最适退火温度为44℃～54.5℃;最佳扩增程序设定为94℃预变性5 min;然后94℃变性20 s,44℃～54.5℃复性1 min,72℃延伸1 min 20 s,共进行38个循环;最后72℃延伸6 min,4℃保存。该体系在黑果枸杞不同样品中所得条带清晰且多态性丰富,有助于后续青海省黑果枸杞种质资源筛选和遗传多样性分析研究。