草原短尾羊Brachyury蛋白多克隆抗体制备

编号 zgly0001738612

文献类型 期刊论文

文献题名 草原短尾羊Brachyury蛋白多克隆抗体制备

作者 杨光  霍雨佳  苏红  智达夫  刘默凝  窦傲蕾  王家业  曹贵方 

作者单位 内蒙古农业大学兽医学院  内蒙古自治区基础兽医学重点实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报:自然科学版 

年卷期 2022,50(4)

页码 1-7

年份 2022 

分类号 S826.92 

关键词 草原短尾羊  胚胎  Brachyury基因  多克隆抗体制备 

文摘内容 【目的】克隆草原短尾羊Brachyury基因(即T基因)编码区(CDS),并制备Brachyury蛋白特异性多克隆抗体,为草原短尾羊短尾表型机制研究提供重要的试验材料。【方法】提取草原短尾羊16 d胚胎的组织RNA,反转成cDNA,以cDNA为模板,采用PCR方法克隆草原短尾羊Brachyury基因CDS全长序列。将Brachyury基因CDS全长序列连接至pEASY■-Blunt E1载体,构建原核表达载体pEASY■-Blunt E1-Brachyury,并进行NheⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定。将原核表达载体导入RosettagamiB(DE3)大肠杆菌,并进行IPTG诱导表达,对表达产物进行回收纯化。利用纯化后的表达产物免疫6周龄日本大耳白兔,用间接ELISA(iELISA)法测定血清多克隆抗体效价。以制备的多克隆抗体为一抗,采用Western blot法检测草原短尾羊16,20,25和30 d胚胎中Brachyury蛋白的表达水平。【结果】克隆了1335 bp的草原短尾羊Brachyury基因CDS全长序列,成功构建了原核表达载体pEASY■-Blunt E1-Brachyury,表达获得了49.16 ku的重组Brachyury蛋白。成功制备了重组Brachyury蛋白多克隆抗体,抗体效价达1∶1500,该多克隆抗体可以特异性识别草原短尾羊胚胎中的Brachyury蛋白。草原短尾羊16 d胚胎中Brachyury蛋白的表达量最高。【结论】成功制备草原短尾羊Brachyury蛋白兔血清多克隆抗体,抗体效价为1∶1500,该多克隆抗体可以特异性识别草原短尾羊胚胎中的Brachyury蛋白。