苦瓜核糖体失活蛋白MAP30基因的克隆及原核表达

编号 zgly0000530418

文献类型 期刊论文

文献题名 苦瓜核糖体失活蛋白MAP30基因的克隆及原核表达

作者 杨洲平  黄乾明  刘一江  陈平  杨菲  王晗光 

作者单位 四川农业大学生理科学与理学院 

母体文献 四川农业大学学报 

年卷期 2007,25(3)

页码 262-266

年份 2007 

分类号 S642.501  Q78 

关键词 分子克隆  基因表达  PCR  大肠杆菌 

文摘内容 以载有银田牌长白苦瓜MAP30基因(YT-MAP30，Genebanka Ccession No：DQ643968)的质粒DNA(pMD-YT-MAP30)为模板，PCR扩增其成熟肽编码区YTm-MAP30，与原核表达载体pET-30a(＋)连接构建重组表达质粒pET-YTm-MAP30，酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS感受态细胞，菌落PCR筛选鉴定阳性菌落。30℃培养阳性菌落，IPTG诱导表达不同时间，其表达产物用SDS～PAGE检测并进行可溶性分析。DNA测序结果表明重组质粒pET-YTm-MAP30中YTm-MAP30的序列和插入位点正确。SDS-PAGE分析结果显示IPTG诱导4h后在35kD处出现一条增加的表达蛋白条带，且以可溶形式表达。为应用原核表达系统生产MAP30蛋白提供了实验依据。