超声波辅助农杆菌转化OT百合‘罗宾娜’的研究

编号 zgly0000823583

文献类型 期刊论文

文献题名 超声波辅助农杆菌转化OT百合‘罗宾娜’的研究

作者 王岚  刘雅莉  娄倩  田菲菲 

作者单位 西北农林科技大学林学院  西北农林科技大学园艺学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2013(6)

页码 161-166

年份 2013 

分类号 S682.265.032 Q785 

关键词 超声波  百合  农杆菌  转基因 

文摘内容 【目的】:通过超声波处理辅助农杆菌转化OT百合小鳞片,提高农杆菌介导法转化百合的效率。【方法】:以OT百合‘罗宾娜’(Lilium tenuifoliumoriental×tumpet‘Robina’)的再生小鳞片为外植体,分别以80W功率的超声波处理1,2,3,4,5min,通过超声波处理辅助根癌农杆菌进行外源基因的转化,同时以未进行超声波处理为对照;利用GUS组织化学法,分别检测转化脱菌后筛选培养7d的外植体和筛选培养60d后形成的潮霉素抗性再生植株叶片、小鳞片、根系的GUS瞬时表达和稳定表达,提取潮霉素抗性植株基因组DNA进行GUS和HPT基因的PCR扩增分析。【结果】:超声波处理的农杆菌介导转化的百合外植体经GUS组织化学染色,多数可见蓝色斑点,且以3min超声波处理的蓝色最深;3min超声波处理的外植体对潮霉素的抗性率最高达48.85%,未经超声波处理的仅为15.56%,二者差异达显著水平。从53个潮霉素抗性再生植株的DNA样品中扩增得到了GUS基因和HPT基因的扩增片段,其中超声波处理3min的PCR阳性植株转化率最高,为28.30%,而未进行超声波处理的PCR阳性植株转化率仅为5.66%,初步证明外源基因可能整合到百合基因组中。【结论】:20℃条件下80W功率超声波处理3min,可以有效提高农杆菌介导法转化OT百合的效率。