双价抗虫植物表达载体p3300-bt-pta转化苜蓿的初步研究

编号 zgly0000560814

文献类型 期刊论文

文献题名 双价抗虫植物表达载体p3300-bt-pta转化苜蓿的初步研究

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 熊恒硕  康俊梅  杨青川  孙彦  唐克轩 

作者单位 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所  中国农业大学动物科技学院草地研究所  复旦大学生命科学院 

母体文献 中国草地学报 

年卷期 2008,30(1)

页码 21-26

年份 2008 

分类号 Q943.2  S541 

关键词 双价抗虫  转基因植株  CryIA(a/c)基因  pta基因  紫花苜蓿 

文摘内容 以中苜1号无菌苗子叶为外植体，采用农杆菌介导的叶盘法，将含有CryIA(a)/CryIA(c)基因、半夏凝集素(pta)基因和bar基因的双价抗虫植物表达载体p3300-Bt-pta导入苜蓿子叶中，在含除草剂的筛选培养基中连续筛选，获得抗性转化植株。研究了农杆菌菌液浓度、浸染时间、共培养时间等因素对苜蓿转化效率的影响，结果表明：各因素对苜蓿转化率均有不同程度的影响，当转化的菌液浓度ODsoo为0．6、浸染时间为10min、共培养时间为3d时转化效率较好。载体的抗性基因为除草剂草丁膦抗性的Bar基因，对子叶外植体的最佳筛选浓度为8mg/L；抑制农杆菌所用Carb的有效工作浓度为400mg/L，以后继代逐次减少用量到100mg/L；按此方法以根癌农杆菌菌株EHA105介导，将双基因Bt和pta导入紫花苜蓿品种“中苜1号”，最终获得122棵除草剂草丁膦(ppt)抗性的植株，经过初步的PCR及RT-PCR分子生物学检测，有30棵检测到特异性条带，表明外源基因已成功整合到苜蓿基因组中，并在转录水平得到表达。