草兔卵透明带蛋白2的克隆与原核表达

编号 zgly0001534456

文献类型 期刊论文

文献题名 草兔卵透明带蛋白2的克隆与原核表达

作者 周智敏  韩崇选 

作者单位 西北农林科技大学林学院 

母体文献 西北林学院学报 

年卷期 2016年02期

年份 2016 

分类号 S764.5 

关键词 卵透明带  草兔  抗原表位  ZP2  诱导表达 

文摘内容 哺乳动物卵透明带蛋白具有极强抗原性,产生的抗卵透明带蛋白抗体可以有效阻碍精卵结合。为了探究草兔卵透明带2(zona pellucida 2,ZP2)蛋白抗原性,以及定位抗原表位。根据GenBank上欧洲兔的卵透明带2基因序列,设计5′端磷酸化的反转录引物用于合成特异cDNA作为模板,通过普通PCR扩增草兔ZP2基因。测序获得的2 184bp序列比对成功后,预测其信号肽和跨膜区域分别位于ZP235-56和ZP2698-717。将克隆获得954bp的hZP2基因连入pET-28a(+)的EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,成功构建了重组原核表达载体pET-28a-hZP2后转化大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21。重组的E.coli BL21经诱导后表达41.17kD可溶性的hZP2融合蛋白,经优化诱导表达体系后,确定较好的诱导条件是37℃下0.7mmol·L-1 IPTG诱导15h。经Western blot鉴定,结果表明相对于表达ZP2大片段基因,hZP2融合蛋白表达量明显提高。