猪萨佩罗病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

编号 zgly0001733337

文献类型 期刊论文

文献题名 猪萨佩罗病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者 李倩倩  赵福杰  丁庆文  张云飞  郑兰兰 

作者单位 河南农业大学动物医学院  河南省动物性食品安全重点实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2021,(11)

页码 2-8

年份 2021 

分类号 S852.651 

关键词 猪萨佩罗病毒  5&apos  非编码区  TaqMan实时荧光定量PCR  河南 

文摘内容 [目的]建立快速、特异、灵敏的猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)TapMan实时荧光定量(RTqPCR)检测方法,为临床快速检测PSV提供新方法。[方法]参照GenBank中PSV的全基因序列,针对PSV 5'端保守区设计1对特异性引物,PCR扩增目的片段,将目的片段克隆至pMD-18T载体,构建阳性重组质粒,并以阳性质粒标准品为模板,建立标准曲线。在此基础上,设计特异性引物与探针,进行反应体系和反应条件优化,建立PSV TaqMan RT-qPCR检测方法,并对方法的敏感性、特异性和重复性进行验证。应用建立的方法对2018-2019年在河南不同地区猪场收集的83份样品(粪便样品39份,肠道样品44份)进行检测。[结果]建立了PSV TaqMan RTqPCR检测方法,该方法的灵敏度为3.88×10~1拷贝/μL;与猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪δ冠状病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒均无交叉反应,特异性良好;批内与批间变异系数均小于1.0%,重复性较好。临床样品检测结果表明,TaqMan RT-qPCR检测PSV呈阳性的样品有31份(22份粪便样品,9份肠道样品)检出率为37.3%(31/83),显著高于普通PCR检测结果(检出率12.0%(10/83))。[结论]建立了TaqMan RT-qPCR检测方法,该方法灵敏度高,特异性好。