基于URP-PCR多态性片段的苦瓜枯萎病菌特异性检测技术的建立

编号 zgly0001674416

文献类型 期刊论文

文献题名 基于URP-PCR多态性片段的苦瓜枯萎病菌特异性检测技术的建立

作者 郭康迪  赵莹  李震  丁胜利  文才艺 

作者单位 河南农业大学植物保护学院 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2019年03期

年份 2019 

分类号 S436.429 

关键词 URP-PCR多态性片段  苦瓜枯萎病  尖孢镰孢菌苦瓜专化型  分子检测 

文摘内容 通过URP（Universal Rice Primers）-PCR分析尖孢镰孢菌苦瓜专化型基因组DNA扩增片段多态性,筛选检测尖孢镰孢菌苦瓜专化型的特异性引物,并建立了基于该引物的PCR检测方法。结果表明,特异性引物为FOMM-SPF/FOMMSPR,PCR检测体系为25μL,包括2Green Taq M aster Mix 12.5μL,10 mmol·L-1的上下游引物各1μL,模板DNA 1μL,灭菌去离子水补足至25μL; PCR程序为95℃预变性3 min,94℃变性15 s,57℃退火30 s,72℃延伸20 s,共30个循环,循环结束后72℃延伸5 min;特异性扩增片段大小294 bp,检测灵敏度为2 ng·μL-1DNA或50个孢子·500 mg-1土壤。该引物及其检测方法对尖孢镰孢菌苦瓜专化型的检测特异性好、灵敏度高,可以从土壤和植物样品中快速准确地检测出苦瓜枯萎病菌,无需病原菌的分离培养和致病性检测,对苦瓜枯萎病的早期诊断和预警及有效防控具有重要的指导意义。