利用酵母建立植物抗逆基因快速筛选体系

编号 zgly0000720623

文献类型 期刊论文

文献题名 利用酵母建立植物抗逆基因快速筛选体系

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 宋红改  蒋晶  乔桂荣  杨晔  周婧  潘銮银  卓仁英 

作者单位 三峡大学生物技术研究中心湖北省天然产物研究与利用重点实验室  中国林业科学研究院亚热带林业研究所 

母体文献 浙江林学院学报 

年卷期 2010,27(6)

页码 890-895

年份 2010 

分类号 S722.3 

关键词 林木育种学  旱柳  东南景天  cDNA文库  酵母  耐盐性  耐镉性  生长曲线 

文摘内容 以旱柳Salix matsudana及东南景天Sedum alfredii为实验材料,利用改进的SMART(switching mechanism at 5’end of RNA transcript)技术分别构建了旱柳盐胁迫和东南景天氯化镉胁迫后的全长cDNA文库,把文库包装到酵母表达载体中,转化酿酒酵母感受态细胞,通过在尿嘧啶缺陷型培养基上添加不同浓度梯度的筛选压来筛选酵母高抗转化子,并对其基因进行鉴定。结果从旱柳盐胁迫全长cDNA文库中得到了2个能耐受1.709mol·L-1氯化钠的阳性转化子,从东南景天氯化镉胁迫全长cDNA文库中得到了2个能耐受0.123mmol·L-1氯化镉的阳性转化子。分别测定对照菌(转空载体重组菌INV/pYES2.1)和转cDNA重组菌在无胁迫、高盐(1mol·L-1氯化钠)和高氯化镉(150μmol·L-1)胁迫下的生长曲线。结果表明高耐盐/耐镉相关基因的表达对酵母正常生长没有影响。在含高盐或者高镉的培养基里,2个转基因重组菌的延滞期短于对照菌。这表明高耐盐/耐镉相关基因的表达可以提高酵母细胞的耐盐/耐镉能力。对6号耐盐转化子序列进行生物信息学和表达模式分析,发现该基因为一盐胁迫应答相关基因SMpla6(暂定名)。用酿酒酵母建立了一个高效快速筛选植物抗逆基因的体系,研究结果为快速克隆植物抗逆相关基因奠定基础。