拟南芥未知基因At018融合蛋白原核表达条件的优化及纯化

编号 zgly0001496184

文献类型 期刊论文

文献题名 拟南芥未知基因At018融合蛋白原核表达条件的优化及纯化

作者 孙博  卜媛媛  高野哲夫  柳参奎 

作者单位 东北林业大学东北油田盐碱植被恢复与重建教育部重点实验室  盐碱地生物资源环境研究中心  东京大学亚洲生物资源环境研究中心 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2015年04期

年份 2015 

分类号 Q943.2 

关键词 拟南芥  At018基因  原核表达  蛋白纯化 

文摘内容 本课题组在前期的研究中利用Al Cl3胁迫筛选碱茅全长c DNAs酵母表达文库获得到一个与铝毒害相关的未知基因(基因编号为018,用put018表示),该基因与拟南芥中未知基因(基因号为At5g57345,本研究中用At018表示)有较高的同源性。为了获得At018的纯化蛋白,本研究将拟南芥At018基因克隆后构建原核表达载体p GEX-6p-3-At018,再将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。同时运用传统方法优化诱导条件,以提高重组融合蛋白的表达效率。SDS-PAGE分析结果表明,30℃下0.1 mmol/L IPTG的条件下诱导3 h后,GST-At018融合蛋白的表达量最大,蛋白分子质量与预测值相符,该蛋白主要以可溶性形式存在;接着利用Glutathione Sepharose4 Fast Flow亲核层析树脂纯化最终获得GST-At018融合蛋白。本研究可为进一步进行At018的功能解析提供基础。