小反刍兽疫H蛋白主要抗原表位的原核表达

编号 zgly0001362685

文献类型 期刊论文

文献题名 小反刍兽疫H蛋白主要抗原表位的原核表达

作者 田晓灵  赵永刚  宋厚辉  王志亮  王凤龙 

作者单位 内蒙古农业大学动物医学与科学学院  中国动物卫生与流行病学中心  中国科学院青岛生物能源与过程研究所 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2009年03期

年份 2009 

分类号 S855 

关键词 小反刍兽疫  H基因  表达  抗原位点 

文摘内容 目的表达小反刍兽疫病毒H蛋白的主要抗原位点用于检测与预防。方法用DNAStar分析小反刍兽疫病毒H基因的主要抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中扩增PPRV的H基因的主要抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,最后用PCR、酶切和测序分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,经不同浓度的IPTG诱导表达PPRVH基因的主要抗原位点;用SDS-PAGE和Western-blotting分析所有蛋白的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;对重组质粒PET-28b-H66-249和PET-28b-H281-550酶切后,均出现预期相符的片段;DNA测序表明插入片段的序列与小反刍兽疫H蛋白基因完全一致,其大小分别为569bp和831bp;将重组表达的蛋白经SDS-PAGE和Western-blotting检测,证明所有的蛋白均得到表达。结论成功表达了PPRVH基因的主要抗原蛋白,为日后的检测与预防工作奠定了基础。