野生小果油茶ISSR-PCR反应体系的建立与优化

编号 zgly0000831950

文献类型 期刊论文

文献题名 野生小果油茶ISSR-PCR反应体系的建立与优化

学科分类 220.45;经济林学

作者 李国帅  曹福祥  彭继庆  胥文  胡双喜 

作者单位 中南林业科技大学 

母体文献 中南林业科技大学学报 

年卷期 2014(4)

页码 36-42

年份 2014 

分类号 S794.4 

关键词 野生小果油茶  ISSR—PCR  单因素实验  正交试验设计 

文摘内容 为建立一个具有良好稳定性和可重复性的野生小果油茶ISSR-PCR反应体系, 以提取的野生小果油茶总DNA为供试材料, 利用单因素试验, 正交试验设计L16(45)和方差分析对DNA模板的量,引物浓度, dNTPs浓度, Mg2+浓度, Taq DNA聚合酶的量5个影响ISSR-PCR反应体系的因素进行优化研究。确定野生小果油茶ISSR-PCR最优反应体系为: 在20μL的反应体系中, DNA模板为30 ng, 引物浓度为0.7μmol/L, dNTPs浓度为0.25 mmol/L, Mg2+浓度为2.0 mmol/L, Taq DNA聚合酶的量为1.75 U。方差分析结果表明, 5个因素对体系的影响均未达到显著水平, 其中引物浓度对反应体系影响最大。应用建立的体系对5份野生小果油茶样品进行扩增, 证明了该体系具有稳定性和可重复性。