金花茶FLS基因的克隆及其植物表达载体的构建

编号 zgly0001461419

文献类型 期刊论文

文献题名 金花茶FLS基因的克隆及其植物表达载体的构建

作者 周兴文  李纪元  殷恒福  范正琪  李辛雷 

作者单位 中国林业科学研究院亚热带林业研究所  广西玉林师范学院 

母体文献 植物研究 

年卷期 2013年01期

年份 2013 

分类号 S685.13 

关键词 金花茶  黄酮醇合成酶  RNA干扰  表达载体构建 

文摘内容 利用RT-PCR和RACE技术,从我国珍稀濒危植物金花茶花瓣中获得了黄酮醇合成酶(Flavonol synthase,FLS)基因的cDNA全长,命名为CnFLS,GenBank登录号JF343560.1。根据该基因序列设计全长扩增引物P3/P4进行PCR扩增,将扩增产物插入PMD18-T载体并转化克隆菌株DH5α,提取质粒DNA酶切鉴定,通过酶切连接的方法将该基因与改造后的pCAMBIA1300表达载体连接,成功构建了该基因的正义表达载体pCAM-CnFLS。根据该基因的保守序列设计了含有酶切位点的特异引物G1/G2,扩增出250 bp的干扰片段并将其克隆到PMD18-T载体,在中间载体pUCCRNAi及表达载体pCAMBIA1300的基础上,通过多次酶切连接,成功构建了金花茶FLS基因的干扰表达载体pCAMRNAi-CnFLS。金花茶正义及干扰植物表达载体的成功构建,为进一步研究该基因的功能及其对花色的调控效应奠定了基础。