柑橘溃疡病菌快速诊断胶体金速测卡的研制

编号 zgly0001420276

文献类型 期刊论文

文献题名 柑橘溃疡病菌快速诊断胶体金速测卡的研制

作者 殷幼平  吴瑜佳  于红  李蒙  王中康 

作者单位 重庆大学生物工程学院基因研究中心 

母体文献 植物保护 

年卷期 2012年02期

年份 2012 

分类号 S436.661.1 

关键词 胶体金  单克隆抗体  免疫层析 

文摘内容 将制备并提纯的抗Xcc单克隆抗体、多克隆抗体及重组抗体,采用间接ELISA方法对比其效价和特异性,筛选用于胶体金速测卡的最优抗体;采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗Xcc单抗Xcc-2D8,固定于金标垫上;利用双抗夹心原理,将单抗Xcc-2D6和羊抗鼠抗体分别固定于硝酸纤维素膜上,作为检测线(T线)和质控线(C线),经试验条件优化,组装胶体金速测卡密封干燥保存。对Xcc菌悬液及柑橘样本浸泡液进行检查。结果表明ELISA方法筛选出2株特异性强、稳定性好的抗体(Xcc-2D8效价为1:128 000倍、Xcc-2D6效价为1:256 000倍),应用于胶体金速测卡的研发;所研制速测卡对Xcc菌悬液的最低检测下限为1×103～1×104 cfu/mL,对多个地区的206份柑橘样本进行实际检测所得结果与qPCR方法所得结果具有较高一致性(kappa值=95.15%),混杂的柑橘组织液对检测结果无影响,检测时间控制在10min以内,检测常见细菌及植物病菌显示特异性良好,各批次速测卡无批间差异,速测卡保存方便稳定性良好。