中药青蒿鲨烯合酶的大肠杆菌表达、纯化与功能鉴定

编号 zgly0000519271

文献类型 期刊论文

文献题名 中药青蒿鲨烯合酶的大肠杆菌表达、纯化与功能鉴定

作者 李振秋  王花红  王红  李国凤  叶和春 

作者单位 中国科学院植物研究所光合作用与环境分子生理学院重点实验室  河北大学生命科学学院  中国科学院研究生院 

母体文献 应用与环境生物学报 

年卷期 2007,13(3)

页码 309-312

年份 2007 

分类号 Q786  Q946.8 

关键词 鲨烯合酶  大肠杆菌表达  功能鉴定  青蒿 

文摘内容 利用PCR方法，将经RACE方法克隆到的中药青蒿鲨烯合酶cDNA(AF302464)开放阅读框的3’末端截短99bp，插入到原核表达载体pET30a(＋)的NcoⅠ和BamHⅠ酶切位点之间，构建N端和C端均携带有HIS。表达标签的鲨烯合酶重组表达载体pETSSA．将pETSSA转入大肠杆菌BL21(DE3)，0．5mmol／LIPTG(isopropyl—beta—D—thiogalactoside)28℃诱导重组鲨烯合酶的表达．表达产物经镍琼脂糖柱纯化．纯化蛋白加入酶促反应体系(含FPP和NADPH)，GC—MS分析酶促反应体系的正己烷萃取物，结果显示重组鲨烯合酶可以催化FPP向鲨烯的转化．青蒿鲨烯合酶的功能鉴定为进一步利用反义或RNAi技术限制甾类生物合成，从而提高青蒿中的青蒿素含量提供了基础�