实时荧光定量PCR构建朊病相关细胞因子标准品质粒和标准曲线

编号 zgly0001382971

文献类型 期刊论文

文献题名 实时荧光定量PCR构建朊病相关细胞因子标准品质粒和标准曲线

作者 刘爱玲  周向梅  杨鸣琦  刘爱林  赵德明 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院  中国农业大学国家海绵状脑病实验室  河北省邯郸市动物疫病预防控制中心 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2010年06期

年份 2010 

分类号 S852.65 

关键词 PrP106-126  Real-time PCR  质粒  标准曲线 

文摘内容 为能够用实时荧光定量PCR检测PrP106-126作用的鼠巨噬细胞细胞因子的表达水平,构建目的基因IL-1β、TNF-α、IL-6和内参基因β-actin的标准品质粒和标准曲线。根据GenBank中鼠基因编码区保守序列,设计特异性引物;细胞经PrP106-126作用后,提取总RNA。经反转录、PCR扩增、纯化、连接和转化后,提取质粒并测序鉴定,获得IL-1β、TNFα-、IL-6和β-actin质粒;将质粒梯度稀释,进行荧光定量PCR,获得标准曲线及回归方程。结果显示,产物溶解曲线峰值单一,引物特异性高;标准曲线相关系数r2=0.999,表明线性关系好,成功构建了目的基因和内参基因的标准品质粒和标准曲线。