转基因抗虫棉外源DNA插入整合结构分析和转化事件特异性检测方法的建立

编号 zgly0001433930

文献类型 期刊论文

文献题名 转基因抗虫棉外源DNA插入整合结构分析和转化事件特异性检测方法的建立

作者 侯娜  贺辉群  董美  徐荣旗  宛煜嵩  金芜军  刘好宝 

作者单位 中国农业科学院烟草研究所  中国农业科学院生物技术研究所 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2012年03期

年份 2012 

分类号 S562 

关键词 抗虫棉  整合结构  PCR检测  转化事件特异性 

文摘内容 通过3’端2次高效热不对称交互PCR(hiTAIL-PCR)和5’端4次hiTAIL-PCR及1次长链PCR获得了转基因抗虫棉材料06N-119的外源DNA插入片段的全序列。外源DNA插入片段全长11578bp,由NptⅡ基因和Bt基因两个表达盒串联构成。插入位点处缺失75个碱基,未发生基因重组现象。根据3’端旁侧序列设计引物,特异性和灵敏度检测结果表明,建立的3’端定性PCR检测方法特异性强,灵敏度高,最低检测限为每100ng模板量的0.05%,相当于11个靶标序列拷贝。本研究结果对转基因抗虫棉外源基因检测和生物安全评价具有重要意义。