闽楠、红楠AFLP反应体系建立

编号 zgly0001351696

文献类型 期刊论文

文献题名 闽楠、红楠AFLP反应体系建立

作者 田晓俊  温强  汪信东  杨青  江香梅 

作者单位 江西省林业科学院  江西农业大学林学院 

母体文献 林业科技开发 

年卷期 2009年03期

年份 2009 

分类号 S792.24 

关键词 闽楠  红楠  AFLP  反应体系  优化 

文摘内容 以闽楠、红楠总基因组DNA为模板,对AFLP分析各环节的条件进行了优化和筛选,建立了适合于闽楠、红楠AFLP分析的最佳反应体系。其中:酶切反应条件为在20μL反应体系中,加入模板DNA 150 ng,Buffer22μL,BSA0.2μL,EcoRI 3U,MseI 2U,37℃酶切4 h,65℃变性10 min,4℃保存;连接反应条件为将酶切产物中加入5μL连接体系(包括T4 Buffer 2.5μL,EcoRI接头5 pmol,MseI接头50 pmol,T4连接酶1U),16℃连接过夜。预扩增反应条件为在20μL体系中,加入稀释25倍的连接产物5μL,Mg2+(25 mM/L)1.6μL,dNTP(2 mM/L)2μL,预扩增引物E00、M00各30 ng,Taq酶1U。选择性扩增反应条件为:在20μL体系中,加入稀释100倍的预扩增产物5μL,Mg2+1.2μL,dNTP 2μL,选择性扩增引物(E+3/M+3)60 ng,Taq酶1U。本实验结果为闽楠、红楠AFLP分析打下了良好的实验基础。