毛白杨4-CL cDNA的克隆、表达及活性分析

编号 zgly0000457159

文献类型 期刊论文

文献题名 毛白杨4-CL cDNA的克隆、表达及活性分析

学科分类 220.99;林学其他学科

作者 杨向东  王汉中  胡赞民  刘贵华  沈金雄 

作者单位 中国农业科学院油料作物研究所  中国科学院遗传与发育生物学研究所 

母体文献 华中农业大学学报 

年卷期 2006,25(2)

页码 101-105

年份 2006 

分类号 S792.117.035.3 

关键词 毛白杨  4-香豆酰辅酶A连接酶  原核表达  偏爱性 

文摘内容 从毛白杨(Populus tomentosa)木质化茎中提取总RNA, 利用RT—PCR技术进行cDNA扩增, 获得1条1621bp的片段。测序结果表明: 该片段编码536个氨基酸组成的多肽, 序列中包含所有已知4-CL蛋白的2个特征序列box Ⅰ(SSGTTGLPKGV)和boxⅡ(GEICIRG)。将cDNA克隆到原核表达载体pET-32a(+)中, 并转化大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞BL21(DE3)。IPTG诱导后, 经SDS-PAGE和Western—blot分析表明, 4-CL基因在大肠杆菌Bk。中获得表达, 所表达融合蛋白的分子量约为70ku。酶活性分析表明: 该重组蛋白对底物PA、FA、CA均表现出催化活性, 其偏爱性顺序为PA〉FA〉CA, 对SA则没有活性。