大麻基因组DNA提取及AFLP体系的建立

编号 zgly0000703399

文献类型 期刊论文

文献题名 大麻基因组DNA提取及AFLP体系的建立

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 陈璇  胡尊红  郭鸿彦  张庆滢  许艳萍  郭孟璧  杨明 

作者单位 云南农业科学院经济作物研究所  云南农业大学农学与生物技术学院 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2010,8(3)

页码 619-625

年份 2010 

分类号 Q959.212.06 

关键词 抗大麻  DNA提取  优化  AFLP 

文摘内容 本研究以大麻嫩叶为材料,以改进的SDS法,提取了高质量的大麻基因组DNA,经过酶切、连接、预扩增、选择性扩增、银染等试验条件的优化,建立了AFLP反应体系。研究结果表明: 在常规的SDS提取液里加入8μL/mLβ-巯基乙醇(V/V)和3%PVP(M/V)能够提取到高质量的适用于AFLP的基因组DNA;选取150ng大麻基因组DNA来进行酶切,EcoRⅠ和MseⅠ各0.5U,在37℃酶切4h,即可完全酶切。最优的选择性扩增体系为20μL反应体系中含有1.0U Taq DNA polymerase、1.0μL25mmol/L Mg2+、0.4μL10mmol/LdNTPs、50ng/μL引物各1.0μL、4.0μL稀释50倍的预扩增产物及2μL10×PCR Buffer;使用该方法,获得了清晰、稳定的图谱并筛选到了18对多态性较好的AFLP引物组合。