GDNF和LIF对小鼠精原干细胞体外增殖的影响

编号 zgly0000807444

文献类型 期刊论文

文献题名 GDNF和LIF对小鼠精原干细胞体外增殖的影响

作者 索丽娟  胡建宏  王鹏  洪洁赟  王春伟  李青旺  史怀平 

作者单位 西北农林科技大学动物科技学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2012(4)

页码 1-7

年份 2012 

分类号 Q952.6 

关键词 小鼠  精原干细胞  胶质细胞源性神经营养因子  白血病抑制因子  增殖 

文摘内容 【目的】:探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和白血病抑制因子(LIF)对小鼠精原干细胞(SSCs)体外增殖的影响,为后续SSCs的诱导分化、转基因动物生产、基因治疗等研究奠定基础。【方法】:收集6～8日龄小鼠睾丸,采用机械法和2步酶消化法获得细胞悬液。通过多次差异贴壁法分离纯化SSCs和支持细胞,采用碱性磷酸酶(AP)染色和RT-PCR检测Ngn3和Oct4基因2种方法对SSCs进行鉴定。采用单独添加GDNF(添加量为0,10,20,40ng/mL)或LIF(添加量为0,500,1 000,1 500U/mL)的无血清DMEM/F12培养基培养SSCs,于培养第3,5,7天取样,同时用添加GDNF和LIF(各因子单独添加量两两组合)的无血清DMEM/F12培养基培养SSCs,于培养第3,4,5天取样,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测GDNF、LIF对SSCs体外增殖的单因子效应和配伍效应。【结果】:与对照组相比,不论培养时间如何,单独添加20和40ng/mL的GDNF可以显著促进SSCs增殖(P〈0.05),而单独添加不同量LIF对SSCs增殖的影响不显著(P〉0.05);同时添加20ng/mL GDNF和1 000U/mL LIF可以显著促进SSCs的增殖,在该条件下当精原干细胞接种密度为(6×104)～(10×104)mL-1,共培养5d时,其OD490值为0.696。【结论】:DMEM/F12培养基中单独添加20ng/mL GDNF或同时添加20ng/mL GDNF和1 000U/mL LIF可以显著促进小鼠SSCs的体外增殖。