用绿色荧光蛋白监测转基因植物中选择标记基因的消除

编号 zgly0000334865

文献类型 期刊论文

文献题名 用绿色荧光蛋白监测转基因植物中选择标记基因的消除

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 贾洪革  吕玲飞  庞永奇  陈晓英  方荣祥 

作者单位 中国科学院微生物研究所植物生物技术实验室 

母体文献 生物工程学报 

年卷期 2004,20(1)

页码 10-15

年份 2004 

分类号 Q943.2 

关键词 选择标记基因  转基因植物  绿色荧光蛋白  瞬间表达  化学诱导表达 

文摘内容 绿色荧光蛋白(GFP)可直接进行活体观察, 它的这个优点可被用于监测转基因植物中选择标记基因的消除。为此, 构建了植物表达载体pGNG, 将绿色荧光蛋白基因(gfp)和卡那霉素抗性基因表达盒(NosP-nptll-NosT)一起克隆在两个同向的lox位点间, 在第一个lox位点上游置有CaMV35S启动子以驱动GFP表达, 第二个lox位点下游置有不含启动子的大肠杆菌β-葡萄糖醛酸酶(GUS)基因。首先在含卡那霉素(Kan)的培养基上筛选出转pGNG的烟草, 借助绿色荧光可容易地检出表达GFP的转化体。然后用另一转化载体pCambial300-Cre二次转化表达GFP的转基因植物, 利用另一选择标记基因-潮霉素抗性基因(hpt)进行筛选, 在获得的再生植株中, Cre重组酶的表达消除了转化体中两lox位点间的gfp和nptII。实验结果表明可借助GFP荧光的消失, 快速选出nptII被消除的二次转化体, 同时GUS(作为目的蛋白)在CaMV 35S启动子驱动下获得表达。最后利用后代的分离将hpt和cre除去。