葡萄扇叶病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

编号 zgly0001525326

文献类型 期刊论文

文献题名 葡萄扇叶病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

作者 周俊  范旭东  董雅凤  张尊平  胡国君  任芳  李正男 

作者单位 中国农业科学院果树研究所国家落叶果树脱毒中心 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2016年03期

年份 2016 

分类号 S436.631.19 

关键词 葡萄  葡萄扇叶病毒  实时荧光定量RT-PCR  病毒浓度 

文摘内容 根据葡萄扇叶病毒(Grapevine fanleaf virus,GFLV)RNA2序列设计4对特异性引物,通过引物筛选、体系优化,建立了以FL-HP1-F/R为引物的GFLV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法。该方法标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为100%,相关性系数为0.998,灵敏性分别是常规RT-PCR和巢式RT-PCR的100倍和10倍。重复性试验表明组内和组间变异系数均小于2.59%,显示该方法具有较好的检测稳定性。内参基因的稳定性测试结果表明葡萄EF1和GAPDH基因具有较好的试验稳定性。利用建立的荧光定量方法测定12个葡萄样品中GFLV含量,并检测58个葡萄样品,结果表明不同葡萄样品中GFLV含量差异较大,最高含量是最低含量的81 245.5倍,与ELISA和巢式RT-PCR相比,实时荧光定量方法能检测出更多的GFLV分离物。