杧果露水斑病病原菌枝状枝孢霉的巢氏PCR检测方法的建立

编号 zgly0001659149

文献类型 期刊论文

文献题名 杧果露水斑病病原菌枝状枝孢霉的巢氏PCR检测方法的建立

作者 刘晓妹  杨永利  杨石有  张贺  朱朝华  蒲金基 

作者单位 海南大学热带农林学院·热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室  中国热带农业科学院环境与植物保护研究所·农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室 

母体文献 果树学报 

年卷期 2019年01期

年份 2019 

分类号 S436.67 

关键词 杧果  露水斑病菌  常规PCR  巢式PCR  分子检测 

文摘内容 【目的】杧果露水斑病是当前生产上影响杧果产业的重要病害之一,因潜伏期长常在发病初期不易被察觉而错过防治适期,建立其主要致病菌Cladosporium cladosporioides的快速准确检测方法,对于该病的早期诊断和及时防控尤为重要。【方法】将该病菌的ITS序列与NCBI中的数据大量比对后,在差异位点大的区域设计了8对引物,通过筛选获得两对特异性良好的引物及其扩增条件。【结果】两对特异性引物分别是ML-SF9/ML-SR5和ML-SF10/ML-SR10,扩增条件:94℃4 min;94℃45 s,65℃45 s,72℃1 min,36周;72℃10 min,特异条带大小分别为408 bp和424 bp。为了提高检测的灵敏度,又与真菌通用引物ITS1/ITS4结合后,建立了杧果露水斑病病原菌的两套巢式PCR快速检测体系,可检测病菌DNA的含量最低为3.55×10-9ng·μL-1,比常规PCR灵敏度提高了1万倍,且能实现对潜伏期果实的特异性检测。【结论】此技术操作简单、特异性强、灵敏度高,为杧果露水斑病的早期诊断提供了新方法。