胡桃楸ISSR—PCR反应体系的建立及优化

编号 zgly0000686951

文献类型 期刊论文

文献题名 胡桃楸ISSR—PCR反应体系的建立及优化

学科分类 220.45;经济林学

作者 王东娜  牟长城  冯富娟 

作者单位 东北林业大学 

母体文献 实验室研究与探索 

年卷期 2010(11)

页码 18-22,37

年份 2010 

分类号 S792.132 

关键词 胡桃楸  ISSR—PCR  正交设计  单因素试验 

文摘内容 在研究胡桃楸遗传多样性的过程中, 为了获得清晰、重复性好的ISSR扩增结果, 采用改良的CTAB法提取胡桃楸基因组DNA, 利用正交设计与单因子试验相结合的方法对影响胡桃楸ISSR—PCR反应体系的5个主要因素(Taq酶、Mg^2+、dNTP、引物、模板DNA)在4个水平上进行优化设计。通过综合比较分析, 筛选出各反应因素的最佳水平, 建立胡桃楸ISSR—PCR最佳反应体系: 20μL的反应体系中, Taq酶1.0U, Mg^2+ 2.0mmol/L, dNTP0.2mmol/L, 模板DNA50～250ng, 引物0.4μmol/L。在此基础上筛选出13条多态性好、扩增稳定的ISSR引物, 并确立了最佳退火温度和循环次数。这一优化系统的建立为今后利用ISSR技术进行胡桃楸遗传多样性、亲缘关系以及物种保护等的研究奠定了基础。