Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定

编号 zgly0001410199

文献类型 期刊论文

文献题名 Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定

作者 陈云霞  管峰  赵云玲  郑东霞  张维  刘华雷  王志亮 

作者单位 中国动物卫生与流行病学中心  广西大学动物科学学院 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2011年09期

年份 2011 

分类号 S852.659.5 

关键词 Ⅰ类新城疫病毒  辅助性质粒  微型基因组  病毒拯救 

文摘内容 目的本研究旨在构建Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的微型基因组和辅助质粒,为构建病毒拯救体系奠定基础。方法根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的全基因组序列,采用SOE方法将增强绿色荧光蛋白基因(eGFP)插入NDV08-004的3’-Leader和5’-Trailer区域之间后反向插入转录载体pOLTV5中,构建了NDV08-004的微型基因组pLGT-03。将pLGT-03转染辅助病毒NDV08-004感染的表达T7RNA聚合酶BSRT7/5细胞进行功能鉴定。采用RT-PCR将NDV08-004的NP、P和L蛋白基因亚克隆入表达载体pCI-neo中,分别构建了三个辅助质粒pCI-NP、pCI-P、pCI-L。通过构建的微型基因组pLGT-03和三个辅助质粒按照一定的比例共转染BSRT7/5细胞来验证辅助质粒的功能。结果微型基因组pLGT-03转染辅助病毒感染的BSRT7/5细胞后可见明显荧光,表明微型基因组构建成功。微型基因组和辅助质粒共转染可见荧光表达,表明三个辅助质粒均具有相应的功能。结论表明微型基因组和辅助质粒均具有相应的功能,为建立NDV08-004的反向遗传操作平台奠定了基础。