3种假单胞菌CaCl2法感受态细胞制备及转化条件

编号 zgly0001438445

文献类型 期刊论文

文献题名 3种假单胞菌CaCl2法感受态细胞制备及转化条件

作者 赵峰  张颖  李慧  史荣久  韩斯琴 

作者单位 中国科学院沈阳应用生态研究所污染生态与环境工程重点实验室  中国科学院大学 

母体文献 应用生态学报 

年卷期 2013年03期

年份 2013 

分类号 Q93 

关键词 假单胞菌  CaCl2转化  正交试验设计  转化效率 

文摘内容 假单胞菌因其生境和代谢类型的多样性,在污染环境修复、生物转化、生物防治等领域具有广阔的应用潜力;外源基因的导入是假单胞菌遗传改造的重要环节,而感受态细胞的制备和转化方法的建立是导入外源基因的重要方法学基础.本研究以从石油污染土壤中分离筛选的假单胞菌属的3个菌株Pseudomonas putida TS11、P.stutzeri DNB、P.mendocina JJ12为对象,通过3因素4水平正交实验设计,研究了不同CaCl2浓度、热激时间及复苏时间对不同假单胞菌感受态细胞制备及转化效率的影响.结果表明:CaCl2浓度是影响假单胞菌转化效率的最主要因素(P<0.05),且在制备感受态细胞之前用无菌蒸馏水多次洗涤菌体细胞,转化率明显提高.3种假单胞菌的CaCl2转化优化条件分别为:100mmol·L-1CaCl2,热激3min,复苏1.5h;50mmol·L-1CaCl2,热激6min,复苏1.5h;75mmol·L-1CaCl2,热激4.5min,复苏0.5h.在上述转化条件下,3种假单胞菌的外源质粒转化效率均达到105个转化子·μg-1DNA水平.